產(chǎn)品介紹

 本品為綠色熒光標(biāo)記的溶酶體探針，具有504/511nm的最大激發(fā)/發(fā)射波長。本品以溶于無水DMSO的1mM儲存液形式提供。 

使用方法(僅供參考) 
使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對其進(jìn)行簡短離心使DMSO溶液集中于管底。最佳工作濃度需根據(jù)不同的實驗要求、細(xì)胞類型、細(xì)胞或組織的膜通透性等進(jìn)行優(yōu)化。 
1.工作液的配制 
利用培養(yǎng)基或合適的緩沖液將1mM 儲存液稀釋至工作濃度，推薦工作液濃度為50-75nM； 
【注意】：1）為了降低探針加載過度可能引起的假陽性，建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。2）若細(xì)胞在染色后于不含染料的培養(yǎng)基中孵育，會觀察到熒光信號的衰減和細(xì)胞的空泡化現(xiàn)象。 
2.染色 
2 .1 對于貼壁細(xì)胞1）將細(xì)胞置于培養(yǎng)皿中的蓋玻片上，加入合適培養(yǎng)基，使其爬片生長。 
2）待細(xì)胞生長到合適豐度，吸除培養(yǎng)液，加入適量37℃預(yù)熱的含探針工作液。于生長狀態(tài)下孵育30min～2h（具體孵育時間需根據(jù)細(xì)胞類型而定）。 
【注意】：對Lysotracker Green DND-26內(nèi)化過程的動力學(xué)研究表明，活細(xì)胞攝取此染料僅需數(shù)秒即可。缺點(diǎn)在于此探針可能引起溶酶體產(chǎn)生“堿性效應(yīng)Alkalizing effect”，也就是說過長孵育時間會誘導(dǎo)溶酶體pH值提高。建議僅當(dāng)該探針于37℃孵育細(xì)胞1-5min才可用作pH指示劑。 
3）利用新鮮培養(yǎng)基替換上述染色液并在熒光顯微鏡（含合適濾片）下觀察。若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時間。 
2.2 對于懸浮細(xì)胞 
1）離心，吸除上清。 
2）利用37℃預(yù)熱的探針工作液重懸細(xì)胞，于生長狀態(tài)下孵育30min～2h（具體時間需根據(jù)細(xì)胞類型而定）。 
3）離心，吸除染色液，加入新鮮培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。 
4）置于熒光鏡下觀察。若染色不夠充分，建議增加染料濃度或加長染色時間。 
【注意】：對于懸浮細(xì)胞，也可將細(xì)胞貼附于經(jīng)BD Cell-Tak處理過的蓋玻片上，然后使用類似于貼壁細(xì)胞的方法進(jìn)行染色。