產(chǎn)品介紹

基 因 型F- ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm araB::T7RNAP-tetA簡(jiǎn) 要 說(shuō) 明High5TM系列BL21(AI) 感受態(tài)細(xì)胞是大腸桿菌B/r型菌株(E.coli B/r)，BL21(AI) 來(lái)源于BL21菌株，為膜外蛋白酶OMPT的缺陷型菌株。該酶的缺失能夠有效防止表達(dá)的異源目的蛋白在細(xì)菌體內(nèi)的降解。使用L-阿拉伯糖誘導(dǎo)araBAD啟動(dòng)子下游的蛋白表達(dá)。使用葡萄糖可以抑制araBAD啟動(dòng)子下游的蛋白表達(dá)。BL21(AI) 感受態(tài)細(xì)胞適用于任何以T7啟動(dòng)子為基礎(chǔ)的表達(dá)載體，能夠進(jìn)行高水平的重組蛋白表達(dá)。因?yàn)榫牦w內(nèi)的T7 RNA聚合酶水平能夠進(jìn)行有效調(diào)節(jié)，BL21(AI) 感受態(tài)細(xì)胞能夠有效表達(dá)對(duì)其他BL21細(xì)胞有毒或生長(zhǎng)抑制的蛋白。從BL21(AI) 菌株中獲得目的重組蛋白產(chǎn)量，和其他BL21菌株產(chǎn)量相當(dāng)。High5TM系列BL21(AI) 感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率高達(dá)108cfu/μg。 操 作 說(shuō) 明1.取100μl冰上融化的BL21(AI)感受態(tài)細(xì)胞，加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。2.42℃水浴熱激90秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含50 µg/ml四環(huán)素及所選質(zhì)粒篩選抗生素的2YT 或LB培養(yǎng)基上。5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。注 意：1.Brian Caliendo (Voigt 實(shí)驗(yàn)室)報(bào)道過(guò)pCP20質(zhì)粒比較難于轉(zhuǎn)化到這個(gè)感受態(tài)細(xì)胞中，而pCP20轉(zhuǎn)化到其他菌株中都很正常，但是菌體原因未知。2.即使不加葡萄糖，BL21(AI) 細(xì)胞的araBAD啟動(dòng)子下游的本底蛋白表達(dá)水平仍然很低，加入葡萄糖后能夠進(jìn)一步的降低本底蛋白的表達(dá)水平。3.注 意 事 項(xiàng)1.感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。2.混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。4.誘導(dǎo)時(shí)，IPTG濃度可選（0.1-2mM均可）。5.為獲得需要量的蛋白，最佳誘導(dǎo)時(shí)間，溫度，IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。建議選擇該菌株進(jìn)行蛋白表達(dá)的條件如下：1.使用T7啟動(dòng)子載體（高拷貝或者低拷貝都可以）進(jìn)行蛋白表達(dá)。2.使用其他BL21進(jìn)行蛋白表達(dá)時(shí)，觀察到明顯的細(xì)菌生長(zhǎng)的抑制作用。3.表達(dá)一個(gè)已知的毒性蛋白。

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