產(chǎn)品介紹

基 因 型F- ompT hsdSB(rB- mB-) gal dcm (DE3) pRARE2 (CamR)簡 要 說 明 Rosetta 2(DE3)菌株來源于BL21，是BL21的衍生菌株，為Lon蛋白酶和膜外蛋白酶OMPT的缺陷型菌株，這兩種酶的缺失有效防止異源蛋白在大腸桿菌體內(nèi)的降解。將具有氯霉素抗性的pRARE2質(zhì)粒導(dǎo)入BL21 (DE3)細(xì)胞中即是Rosetta 2(DE3)，pRARE2質(zhì)?？裳a充大腸桿菌缺乏的7種稀有密碼子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA和CGG)對應(yīng)的tRNA，提高外源基因的表達(dá)水平。該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū) (DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶)，可同時表達(dá)T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。Rosetta 2(DE3)感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達(dá)108 cfu/μg DNA。 操 作 說 明1. Rosetta 2(DE3)感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的質(zhì)粒并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的LB無菌培養(yǎng)液，37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取50 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的LB培養(yǎng)基上。5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。注 意 事 項1. 感受態(tài)細(xì)胞最好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。3. 誘導(dǎo)時，IPTG濃度可選（0.1-10 mM均可）。4. 為獲得需要量的蛋白，最佳誘導(dǎo)時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。5. Rosetta 2(DE3) 菌株攜帶 pRARE2質(zhì)粒，除復(fù)蘇培養(yǎng)基為無抗生素外，其余所用培養(yǎng)基、培養(yǎng)液均應(yīng)含有34 µg/ml氯霉素，以防質(zhì)粒丟失。

此產(chǎn)品需要干冰運輸發(fā)貨，會根據(jù)路途及包裝大小收取一定的干冰運費。