產(chǎn)品介紹

?DiD染料是親脂性熒光染料家族成員之一，它可以用來染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。當(dāng)DiD與細(xì)胞膜結(jié)合后其熒光強度大大增強，這類染料有著很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。一旦對細(xì)胞染色，這類染料在整個細(xì)胞膜上擴散，最佳濃度時可以使整個細(xì)胞膜染色。DiD（遠(yuǎn)紅色熒光）可以用來對活細(xì)胞進(jìn)行成像和流式分析。DiD可以用633 nm He–Ne激光器激發(fā)，有著比DiI（一種常見的細(xì)胞熒光染料）更長的激發(fā)波長和發(fā)射波長，在細(xì)胞和組織染色中更有價值。 DiD染色后可進(jìn)行多聚甲醛（不可使用甲醇等其他試劑）的固定，但不建議在染色后進(jìn)行透化的過程。此外，在固定透化（室溫下用0.1% TritonX-100 透化）后，也可以很好地進(jìn)行質(zhì)膜染色。 以每次使用100 μL染色工作液，染色工作液濃度5 μM計算，10 mg配置為工作液大概可以用19009次。產(chǎn)品參數(shù)：Ex/Em (MeOH) = 644/663 nm注意事項：1. 使用前請將產(chǎn)品瞬時離心至管底，再進(jìn)行后續(xù)實驗。 2. DiD染色固定的細(xì)胞或組織樣品時，通常使用配制在PBS中的4%多聚甲醛進(jìn)行固定，使用其它不適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ簳?dǎo)致熒光背景較高。 3. 熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。 4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。應(yīng)用范圍：細(xì)胞膜熒光染料；神經(jīng)元順行和逆行示蹤；細(xì)胞長期示蹤使用方法：1.染色液制備（1）配制儲液：儲液用無水DMSO或EtOH配制，濃度1~5mM。注：未使用的儲存液分裝儲存在-20°C，避免反復(fù)凍融。（2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲液，配制濃度為1~5μM的工作液。注：工作液最終濃度建議根據(jù)不同細(xì)胞系和實驗體系來優(yōu)化。建議從推薦濃度的10倍范圍內(nèi)開始最優(yōu)濃度的摸索。2.懸浮細(xì)胞染色（1）加入適當(dāng)體積的染色工作液重懸細(xì)胞，使其密度為1×106/mL。（2）37°C孵育細(xì)胞2~20 min，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時間不同?？梢?0 min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記效果。（3）孵育結(jié)束，1000~1500 rpm離心5 min。傾倒上清液，再次緩慢加入37°C預(yù)熱的生長培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。（4）重復(fù)步驟（3）兩次以上。3.貼壁細(xì)胞染色（1）將貼壁細(xì)胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。（2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，但要使表面保持濕潤。（3）在蓋玻片的一角加入100 μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。（4）37°C孵育細(xì)胞2~20 min，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時間不同?？梢?0 min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記的效果。（5）吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2~3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，孵育5~10 min，然后吸干培養(yǎng)基。但要使表面保持濕潤。4. 結(jié)果檢測樣品可在培養(yǎng)基中進(jìn)行檢測，可通過熒光顯微鏡成像或流式細(xì)胞儀分析。